近期，农业农村部接连发布了多个关于做好非洲猪瘟疫情防控、非洲猪瘟实验室检测工作的相关通知，全国各地动物疾病预防控制中心、畜牧兽医局、农业局等相关单位纷纷进行非洲猪瘟相关检测仪器设备的采购

非洲猪瘟（African Swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African Swine fever virus，ASFV）感染家猪和各种野猪（不传染人）引起一种急性、出血性、烈性传染病。其特征是发病过程短，最急性和急性感染死亡率高达100%，且只能依靠实验室监测确诊。   

2018年8月3日我国确诊首例非洲猪瘟疫情。

非洲猪瘟样品处理

1. 目的

规范ASFV样品和实验材料的处理程序，保证ASFV相关实验的顺序开展和实验室的生物安全。

2. 适用范围

适用于疑似ASFV临床样品的实验前的处理

3. 程序

3.1实验材料

ASF的易感动物，主要为家猪、野猪和蜱，通常采集的样品为家猪、野猪的血液样品、组织样品以及蜱三类。田间采集的样品通常需要经过简单的预处理，才能进行后续的检测、诊断工作。

血清：用于病毒核酸检测、病毒抗原和抗体检测。将采好的猪血的注射器或采血管在室温下倾斜静止2~4h（防止暴晒），或置于37℃温箱内1h，待大部分血清析出后，取出血清，必要时经离心分离血清。（最低建议量5ml）。

抗凝全血：用于病毒核酸检测和病毒抗原检测。

采血前，在真空采血管或注射器内按比例加入抗凝剂。采集血液，轻轻上下颠倒，使血液与抗凝剂充分混匀，防止血液凝固的同时避免溶血。也可以将血液放入装有玻璃珠的灭菌瓶内，震荡脱落纤维蛋白。必要时，可加入双抗以抑制血源性或采血过程中可能出现的细菌污染。

当血样用于病毒核酸检测时，一般不用肝素而选用EDTA作为抗凝剂。（最低建议量1mL）。

组织样本：活体采集，采用扁桃体，用于临床健康动物ASF监测。

尸体剖检ASF发病动物或死亡动物经解剖取材，包括：ASFV靶器官的采集：脾脏、淋巴结、肾脏、扁桃体。

其他病变组织脏器的采集：采集具有明显病变的肝脏、肺脏、心脏等组织器官，选取部位在病变和健康组织交界处。

腐败动物尸体的样品采集：剖检取股骨，将附着的肌肉和韧带等全部剔除，采集骨髓。最低建议量5克。

蜱的采集：蜱可进行核酸检测、抗原检测和蜱的形态学鉴定，查找猪圈的墙边、墙缝、木质或瓦质的屋顶，或挖掘猪圈地面均可能找到蜱，也可查看猪表皮，采集蜱。

1-1样品保存条件

注：用于病毒分离和病理学检测的样品禁止-20℃保存。

3.2实验器材和试剂

1）台式高速冷冻离心机、组织研磨仪、水浴锅、计时器、冰箱和移液器等。

2）无菌的剪子、镊子、钢珠、2mLEP管、移液器吸头（10μL,200μL、1000μL）等。

3）其他试剂和耗材主要包括：0.01mol/L PBS（PH7.2）、0.8%NaOH、75%酒精棉球等。

3.3样品处理程序

3.3.1血清及全血样品处理

取血清或全血样品1mL于灭菌EP管里，保存备用

3.3.2组织样品处理

适用于脾脏等组织样品和蜱的处理。尽可能减少污染，每取一个组织块或蜱，用火焰消毒剪镊等取样器械，组织块应分别放入灭菌容器内并立即密封，做好标记，注意防止组织间相互污染。

3.3.2.1组织样品的处理应在二级生物安全柜中进行，勿使液体溅到生物安全柜中。

3.3.2.2将0.1-0.2g组织块放入2mLEP管中，用剪刀剪成碎块，加1-2mL0.01mol/L PBS（PH7.2）,再加入1-2粒灭菌钢珠，密封后，表面消毒备用。剩余样品放回容器内，重新密封，表面消毒后保存-70℃冰箱。

3.3.2.3组织样品的破碎可以利用组织研磨仪在生物安全柜外操作，将样品制成组织悬液。

3.4病毒灭活

病毒的灭活处理应在二级生物安全柜中进行，将处理好的血清、全血或者研磨破碎后的组织样品连同EP管放入60℃水浴中，放置30min灭活。

3.5使用后仪器处理

剪刀、镊子等均应放入消毒缸进行消毒，放入铁饭盒内，并装入密封袋内进行高压灭菌处理。装有组织样品保存液的容器和盛有组织块的离心管应密封管口，表面消毒后放入密封袋中高压灭菌。钢珠、吸头等废弃物应用0.8%NaOH浸泡30分钟消毒后，置密封袋内高压灭菌。消毒残液应装入密封容器内高压灭菌处理。

3.6注意事项

操作之前要确认生物安全柜和实验室已进行了彻底的卫生消毒处理，防止样品间交叉感染。

病毒杀灭和防控方式

非洲猪瘟病毒虽然在环境中比较稳定，但在猪肉烹煮处理过程中较易失活，70℃-75℃加热30分钟以上，病毒就会被杀灭，也就是说我们日常烹饪过程中只要把猪肉熟透(包括最中间部位温度至少达到70℃以上)，即使有病毒也会很快失去感染力并丧失活性。

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